分子信标实时荧光定量PCR构绵羊PrP基因质粒和标准曲线

摘要：

目的:为能够用实时荧光定量PCR研究消化系统PrP mRNA的表达水平,构建目的基因PrP的标准品质粒和标准曲线.方法:根据GenBank中绵羊基因编码区保守序列,设计特异性引物和分子信标探针;提取总RNA,经反转录、RT-PCR后,提取质粒,PCR-SSCP及测序鉴定,获得ARQ质粒；将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程.结果:结果显示,本实验设计的分子信标具有特异性强、灵敏度高和结果准确的特性；标准曲线相关系数r2=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因的标准品质粒和标准曲线.

关键词：PrP、RT-PCR、实时荧光定量PCR、标准曲线、质粒、绵羊

所属期刊栏目：27

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目20060733006;甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目GNSW-2007-04;家畜疫病病原生物学国家重点实验室基金项目2008-2009

在线出版日期：2011-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：708-711