利用分枝杆菌的重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌的方法研究

摘要：

目的 利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组.方法 将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5'端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3'端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果.结果 重叠PCR技术得到全长为3 200 bp的敲入片段,PCR与DNA测序结果 证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中.结论 成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的 基因功能研究奠定了基础.

关键词：重组工程系统、pJV53质粒、串联亲和纯化标签、敲入片段、重叠PCR、耻垢分枝杆菌

所属期刊栏目：27

分类号：R378.911(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家"十一五"重大传染病防治科技重大专项"结核病传播模式研究"2008ZX100/03-010-02

在线出版日期：2011-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：539-542,546