多重荧光 RT-PCR同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒方法的建立

摘要：

目的 建立可同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的双重荧光RT-PCR快速检测方法,并应用于临床标本的检测.方法 使用针对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒各亚型代表株保守序列设计的特异性引物和TaqMan探针,通过调整引物、探针浓度优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系.对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行评估,并对临床粪便标本进行检测,与已有的单重荧光RT-PCR方法进行比较.结果 实验结果表明,该检测方法特异性强,对GⅠ型、GⅡ型诺如病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒进行检测,均无交叉反应;对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒核酸的最低检出限分别可达1pg/mL和10pg/mL,并且重复性好;对101份临床标本分别用已有的单重荧光RT-PCR和本文建立的多重荧光RT-PCR进行检测,结果显示本文建立的多重荧光RT-PCR方法对GI型诺如病毒的检测能力优于前者.结论 本研究建立的多重荧光RT-PCR方法能同时对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速检测.

关键词：诺如病毒、多重荧光RT-PCR、检测、GⅠ型、GⅡ型

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分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖州市科技计划项目2010YS04

在线出版日期：2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：311-315