狂犬病病毒G基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的初步建立与应用

摘要：

目的 以重组G蛋白为检测抗原,应用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体.方法 根据GenBank 公布的狂犬病病毒LEP-Flury株基因序列设计引物,PCR扩增出目的基因,连接pGM-T载体,重组质粒经BamH I和XhoⅠ双酶切,连接到表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-G.将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的蛋白,表达蛋白纯化后SDS-PAGE电泳分析并经Western blotting鉴定.纯化的G蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA方法检测93份犬血清抗体.结果 成功构建了克隆载体pGM-G和表达载体pGEX-G,高效表达了狂犬病病毒G蛋白,融合蛋白分子量大小为79kDa,表达蛋白可与狂犬病病毒抗血清发生特异性反应.建立的检测方法灵敏度达到1∶1 600,与商品化的试剂盒相比符合率为96.8%.结论 成功表达狂犬病病毒G蛋白,表达产物可作为检测抗原用于间接ELISA方法中狂犬病病毒抗体的检测.

关键词：狂犬病病毒、G蛋白、表达、间接ELISA

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分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金2009 QN-3,2010 JS-2,0032007008;北京市科委基金项目Z07010501780701;国家农业行业公益项目2008-3

在线出版日期：2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：279-282