编码日本血吸虫Argonaute蛋白全长cDNA克隆、表达及初步鉴定

摘要：

目的 获得编码日本血吸虫Argonaute基因的全长cDNA,并进行克隆和重组融合蛋白表达.方法 利用RACE技术获得编码日本血吸虫Argonaute基因的全长cDNA并对其进行生物信息学分析.利用实时荧光定量PCR(Real time PCR) 分析该基因在日本血吸虫中的转录情况.原核表达保守功能域蛋白和全长蛋白,利用保守功能域重组融合蛋白免疫昆明系小鼠制备多克隆抗体.免疫印迹(Western blot)进行免疫学分析.结果 本研究获得了一个编码日本血吸虫Argonaute基因的全长cDNA,其完整开放阅读框为3 030 bp,编码1 009个氨基酸,预测分子量为111.7 kDa.生物信息学分析表明该基因编码的蛋白序列具有Argonaute家族蛋白的典型结构域特征,且与人、鼠Argonaute蛋白具有较高的同源性. Real-time PCR分析表明该基因在7,14日龄的日本血吸虫童虫中转录较高.Western blot分析制备的多抗具有较高的特异性并能识别全长融合蛋白.结论 获得了编码日本血吸虫Argonaute基因的cDNA及重组蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.

关键词：日本血吸虫、Argonaute蛋白、RACE、功能分析

所属期刊栏目：26

分类号：R383.2(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30901068;上海市科学技术委员会项目10410703400;上海市人才发展基金2009032;中央级公益性科研院所基本科研业务费项目2008JB18和2009JB08

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：830-834