人粒-巨噬细胞集落刺激因子和结核杆菌特异性抗原CFP10嵌合基因重组卡介苗的构建及鉴定

摘要：

目的 构建能共同表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)的重组卡介苗(recombinant BCG, rBCG).方法 运用分子克隆技术,通过SOE法(重叠延伸,Gene splicing by overlap extension),扩增GMCSF-CFP10嵌合基因,将该基因定向克隆到穿梭表达质粒pMV361中,构建重组pMV GMCSF-CFP10质粒.用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG,经热诱导后对rBCG表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析.结果 重组质粒pMVGMCSF-CFP10经PCR、酶切及测序证实构建成功,并在BCG中经热诱导成功表达了具有GMCSF-CFP10的嵌合蛋白.结论 成功构建能表达GMCSF-CFP10蛋白的重组BCG,为发展新型结核病疫苗奠定基础.

关键词：GM-CSF、CFP10、卡介苗、穿梭质粒

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：国家传染病重大专项2008ZX10003-013;国家自然科学基金30872257

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：795-798,804