布鲁氏菌和幽门螺杆菌等6种病原菌16S rRNA和cagA等基因的克隆与鉴定

摘要：

目的 克隆并鉴定布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法作准备.方法 设计、合成布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌flaA、肝螺杆菌flaB和幽门螺杆菌的cagA基因的特异性引物;PCR扩增、克隆16S rRNA、flaA、flaB和cagA基因;对重组质粒进行酶切鉴定、PCR鉴定和测序分析.结果 布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲杆菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因PCR扩增产物分别在612 bp、600 bp、922 bp、637 bp、1 545 bp和1 168 bp处出现特异性目的 条带,结果均与预期扩增的目的 片段大小一致.将PCR产物分别与pMD18-T载体连接并转化感受态细菌大肠埃希菌JM109.对重组质粒pT-BC16S rRNA、pT-MP16S rRNA、pT-CP16S rRNA、pT-CJflaA、pT-HHflaB和pT-HPcagA分别进行酶切鉴定及PCR鉴定,结果均可见特异性目的 条带.测序结果显示,布鲁氏菌的16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因序列与GenBank中细菌相应序列同源性高达100 %,说明上述6种致病菌的16S rRNA、flaA、flaB和cagA基因已成功克隆.结论 成功克隆了布鲁氏菌16S rRNA、支原体的16S rRNA、泰泽氏菌的16S rRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法奠定了基础.

关键词：布鲁氏菌、支原体、泰泽氏菌、空肠弯曲菌、肝螺杆菌、幽门螺杆菌、克隆、鉴定

所属期刊栏目：26

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：北京市科委公益应用项目D07080200720701

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：715-719