载体表达的siRNA分子对小鼠巨噬细胞galactose-specific lectin基因表达的抑制作用

摘要：

目的 构建小鼠巨噬细胞半乳糖特异性凝集素(GSL)靶向的RNAi质粒载体,研究其对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的沉默作用.方法 根据GSL核苷酸序列,合成3条特异性双链小干扰RNA(siRNA)分子,退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,转化大肠杆菌得到阳性克隆,经测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7及尾静脉注射BALB/c小鼠,应用实时定量PCR和免疫组化法评价siRNA载体对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的抑制作用.结果 siRNA载体对小鼠体内GSL基因的抑制率为84-96%,对巨噬细胞GSL基因的抑制率可达61.98%～83.02%. 结论构建的siRNA载体能有效抑制目的 基因在体内外的表达, 该结果为分析半乳糖特异性凝集素在布鲁氏菌侵染过程中的功能奠定了基础.

关键词：RNAi、半乳糖特异性凝集素、巨噬细胞RAW264.7、小鼠

所属期刊栏目：26

分类号：R378.5(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30800813;兵团博士基金2009JC15;高层次人才科研启动资金专项RCZX200828;973项目2010CB530200

在线出版日期：2010-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：467-470,474