幽门螺杆菌NCTC11637、NCTC11639毒素相关基因A的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

摘要：

目的 克隆幽门螺杆菌毒素相关基因A (cytotoxin-associated gene A, CagA)全长序列并进行序列分析,构建表达CagA的真核表达载体,研究CagA调控胃泌素基因的表达.方法 PCR扩增出CagA基因全长片段后构建克隆载体 pMD18-T/ CagA7和pMD18-T/CagA9,测序结果登录GenBank,登录号分别为GQ161098(NCTC11637)和GQ161099(NCTC11639),用测序后筛选的PstI和BamHI内切酶将原核载体上的CagA基因酶切后连接到pcDNA3.1/ZEO(-)真核表达载体上,构建真核表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA7和pcDNA3.1ZEO(-)/CagA9,并经双酶切和 CagA PCR扩增鉴定,最后转染胃癌细胞,检测胃癌细胞中胃泌素基因的表达.结果 序列比对结果显示NCTC11 637和NCTC11 637 CagA的同源性为88.77%,NCTC11 637与已收录的NCTC11 637 (AB 015 416) 同源性为99.22%,序列分析显示两者均有两个CagA酪氨酸磷酸化位点,转染细胞后CagA上调胃泌素基因的表达.结论 成功克隆了CagA全长基因,并构建了含CagA全长基因的真核表达载体,在胃癌细胞内上调了胃泌素基因的表达.

关键词：幽门螺杆菌、CagA、真核载体、胃泌素

所属期刊栏目：26

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30560038

在线出版日期：2010-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：349-352