小鼠β防御素1与甲型流感病毒M2e融合基因表达及其免疫特性研究

摘要：

目的 构建mBD1与M2e融合基因的真核表达载体,并检测其在MDCK细胞中的表达情况,初步探讨其免疫特性.方法 利用PCR方法分别扩增mBD1与M2e基因片段,再通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD1与M2e通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD1-M2e.将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光、RT-PCR产物序列分析检测融合蛋白表达情况,最后采用MTT法检测mBD1-M2e融合蛋白刺激淋巴细胞增殖能力.结果 经鉴定后证实构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,该细胞培养上清液能刺激淋巴细胞增殖.结论 本研究成功构建mBD1-M2e融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,这一结果为进一步研究新型高效通用的流感病毒核酸疫苗奠定了坚实的基础.

关键词：甲型流感病毒、β防御素、融合基因、重叠延伸PCR、免疫荧光

所属期刊栏目：26

分类号：R373.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30671964

在线出版日期：2010-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：299-303