LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达

摘要：

目的 对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达.方法 从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b (+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达.超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI).结果 PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的 序列完全一致.重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的 基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/LEN-5]构建成功.表达蛋白的等电点为7.6.结论 β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础.

关键词：β-内酰胺酶、原核表达、等电聚焦电泳

所属期刊栏目：26

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：266-268