酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白

摘要：

目的 以CVB3 VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3 VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定.方法 酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱.结果 在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LIM结构域结合蛋白1), NADH脱氢酶亚单位4.将筛选的GOLGA2 cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用.结论 本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3 VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4.

关键词：酵母双杂交、柯萨奇病毒、CVB3、VP1

所属期刊栏目：25

分类号：R373.2+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30660010;江西省自然科学基金0540043

在线出版日期：2009-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：991-995