GFP-Rv2626c融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

摘要：

目的 构建含Rv2626c基因的原核表达载体,获得GFP-Rv2626c融合蛋白,为今后开发鉴别结核感染的血清学诊断试剂打下基础.方法 以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,经PCR法扩增得到Rv2626c基因DNA 片段.将扩增片段克隆到pGM-T载体中测序,并进一步将Rv2626c亚克隆到pET28a-GFP中,构建原核重组表达载体pET28a-GFP-Rv2626c.将pET28a-GFP-Rv2626c转化E.coli BL21(DE3),用IPTG 诱导目的 基因表达,经SDS-PAGE和Western-blot 分析和纯化该表达产物.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定,成功构建了重组质粒pET28a-GFP-Rv2626c.用IPTG诱导该质粒转化的E.coli BL21后,获得分子量约46kD的GFP-Rv2626c融合蛋白.经Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-Rv2626c融合蛋白.结论 成功制备出重组GFP-Rv2626c融合蛋白,为开发鉴别结核感染的血清学诊断试剂打下了基础.

关键词：结核分枝杆菌、Rv2626c、GFP、原核表达载体

所属期刊栏目：25

分类号：S852.61;Q78(动物医学（兽医学）)

资助基金：国际科技合作项目基金2006DFA33740;石河子大学科研基金ZRKX200726

在线出版日期：2009-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：361-364