猪链球菌2型中国强毒株CovR重组蛋白及其抗体的制备

摘要：

目的 通过构建pET32a-covR原核表达质粒,表达并提纯CovR重组蛋白,制备其多克隆抗体.方法 采用PCR法,从四川资阳病人分离株05ZYH33基因组扩增CovR的编码基因covR,构建重组表达质粒pET32a-covR,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE鉴定后,His亲和层析柱纯化CovR重组蛋白;免疫新西兰兔制备特异性抗体,Western blot检测兔多抗血清的特异性,间接ELISA检测其滴度.结果 covR基因在原核细胞中得到高效表达,重组蛋白免疫新西兰兔后血清效价高达1∶204 800,且重组蛋白能够与之发生特异性的反应.结论 成功构建了表达载体pET32a-covR,可在E.coli BL21中高效表达,制备了特异性抗体,为进一步研究CovR的调控机理奠定了基础.

关键词：猪链球菌、反应调节因子、CovR、原核表达

所属期刊栏目：25

分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30730081;江苏省自然科学基金项目BK2007013

在线出版日期：2009-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：354-357