期刊专题

10.3969/j.issn.1002-2694.2008.11.002

猪FMDV受体整联蛋白β1亚基LBD多克隆抗体的制备和初步应用

引用
目的 表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p CHOK1细胞β1亚基的表达.方法 利用PCR方法 扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的 pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的 蛋白.然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western-blot方法 分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测.结果 SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr 约为42 000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果 相符.目的 蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1:12 800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面.结论 制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础.

口蹄疫病毒、受体、整联蛋白β1亚基、配体结合域、多克隆抗体

24

R392.11

国家重点基础研究发展计划973项目2005CB523201;国家支撑计划资助项目2006BAD06A14,6BAD06A03

2009-02-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共4页

999-1001,1005

暂无封面信息
查看本期封面目录

中国人兽共患病学报

1002-2694

35-1284/R

24

2008,24(11)

专业内容知识聚合服务平台

国家重点研发计划“现代服务业共性关键技术研发及应用示范”重点专项“4.8专业内容知识聚合服务技术研发与创新服务示范”

国家重点研发计划资助 课题编号:2019YFB1406304
National Key R&D Program of China Grant No. 2019YFB1406304

©天津万方数据有限公司 津ICP备20003920号-1

信息网络传播视听节目许可证 许可证号:0108284

网络出版服务许可证:(总)网出证(京)字096号

违法和不良信息举报电话:4000115888    举报邮箱:problem@wanfangdata.com.cn

举报专区:https://www.12377.cn/

客服邮箱:op@wanfangdata.com.cn