不同型别登革病毒融合外膜基因重组腺病毒的构建及表达

摘要：

目的 构建登革病毒1型和2型外膜蛋白(E蛋白)DⅢ区融合基因的重组腺病毒,在BHK-21细胞中表达.方法 用PCR法扩增登革病毒1型和2型EDⅢ基因,依次克隆入pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-D1/D2EDⅢ.以此为模板,扩增包含CMV启动子-D1/D2EDⅢ-BGH pA 的表达片段,与pENTR4载体连接形成质粒pENTR4-D1/D2EDⅢ,与pAd/PL-DEST进行体外同源重组,形成重组腺病毒载体pAd-D1/D2EDⅢ,在293A细胞系中包装成具有感染性的重组腺病毒,进一步感染BHK-21细胞,用间接免疫荧光法和Western blot法检测重组蛋白在细胞中的表达情况.结果 重组腺病毒构建成功,转染293A细胞后获得2×109pfu/mL滴度的重组腺病毒,感染哺乳动物细胞后能够表达1型和2型EDⅢ区目的 蛋白.结论 不同型别融合基因的重组腺病毒表达载体能有效地表达相应型别的目的 蛋白,为进一步构建单一的四价重组腺病毒应用于登革疫苗研究奠定基础.

关键词：登革病毒、外膜蛋白、DⅢ区、腺病毒载体

所属期刊栏目：24

分类号：R373.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：福建省重点专项基金项目2004YZ01-2

在线出版日期：2008-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：836-840