HIV-1整合酶142-288氨基酸蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定

摘要：

目的 构建人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)整合酶(IN)142-288氨基酸蛋白的原核表达系统,对其进行表达、纯化及抗原性评价.方法 采用PER方法以野生型HIV-1 IN表达质粒为模板扩增IN142-288氨基酸cDNA片段.BamH Ⅰ与Xho Ⅰ双酶切消化后连接到表达载体pGEX一4T1中.构建pGEX-4T1-IN142-288质粒,并进行双酶切与测序鉴定.将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3).经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经液相层析纯化.将纯化后的IN142-288蛋白免疫BALB/c小鼠,对其抗原性进行评价.结果 pGEX-4T1-IN142-288质粒经过双酶切后可见清晰的载体条带和438bp插入的外源基因片段.SDS-PAGE和Western-blot方法对纯化的分析.可见一约40kDa的蛋白条带.ELISA法检测免疫小鼠的抗血清,结果显示3只小鼠均产生了较高滴度的抗体;Western-blot结果显示1号小鼠抗血清可以识别变性转移至NC膜上的野生型HIV-1 IN.结论 成功构建了pGEX-4T1-IN142-288质粒.在原核表达系统中表达的IN 142-288多肽抗原具有良好的抗原性.

关键词：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型、整合酶、蛋白纯化

所属期刊栏目：24

分类号：R372.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：616-620