猪附红细胞体半巢式PCR诊断方法的建立

摘要：

目的 为能够更加准确、敏感的检测出猪附红细胞体(Mycoplasma suis,M.suis),本试验建立一种新的诊断方法-半巢式聚合酶链反应( hemi-nested Polymerase Chain Reaction ,hemi-nested PCR).方法 利用Oligo 6.0和Primer 5.0软件设计筛选出合适的PCR引物,经酶切分析和半巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定.同时与普通PCR诊断方法进行比较.结果 测得的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(AJ504999)同源性为100%.特异性试验结果表明本实验设计的PCR引物不能从弓形虫、链球菌、大肠杆菌、猪肺炎支原体和猪伪狂犬病病毒的基因组DNA中扩增出条带.通过敏感性试验,半巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.12fg的标准模板DNA.通过与普通PCR比较,证明本试验建立的半巢式PCR更具敏感性和实用性.结论 本试验建立的半巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等特点,为猪附红细胞体的检测提供了一种可靠的诊断方法.

关键词：猪附红细胞体、半巢式聚合酶链反应、克隆、序列分析

所属期刊栏目：24

分类号：R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：辽宁省科技计划2006408002-4

在线出版日期：2008-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：322-326