应用多重荧光Real-time PCR快速鉴定猪链球菌2型

摘要：

目的 建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis 2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法.方法 根据S.suis 2 CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2 对引物及其相应探针.通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的实时荧光PCR 方法.结果 能在3 h内对送检组织样品检测确定S.suis 2型和MRP毒力基因,最低检测菌体浓度24CFU/ml.与普通PCR相比,敏感性在检测CPS2J时比普通PCR高至少10倍以上,而在检测MRP时比其高100倍.与葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、S.suis 1型、9型等无交叉反应.同一人在试剂放置0d、20d和60d检测,以及不同人用同一方法检测,变异系数均小于5%,差异不显著.用于检测SSsc0501攻毒后的样品,结果在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑中均检测到S.suis 2阳性,MRP阳性.而在肌肉中,S.suis 2和MRP均为阴性.结论 建立的多重荧光Real-time PCR敏感性高、特异性强,稳定性和重复性好,能用于可疑S.suis 2型组织样品的快速定型和毒力鉴定.

关键词：猪链球菌2型、多重荧光PCR、MRP、CPS2J

所属期刊栏目：23

分类号：S852.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省青岛市科技发展基金O5-2-JC-78

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1083-1087