H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达

摘要：

目的 构建大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因分别在大肠杆菌和昆虫细胞中进行表达,表达产物用Western blot进行检测分析.方法 酶切含有NS1基因的质粒pUC-NS1,分别克隆进大肠杆菌表达载体pET-28a(+)和杆状病毒转移载体pFastBacHT A中,分别获得表达载体pET-NS1和pFast-NS1.将pET-NS1转化大肠杆菌BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达;将pFast-NS1转化DH10Bac感受态细胞,提取重组Bac-NS1 DNA,以M13为通用引物作PCR鉴定,阳性Bac-NS1用脂质体转染sf9细胞,72 h后收集感染细胞.大肠杆菌表达产物和细胞表达产物分别裂解后作SDS-PAGE和Western blot分析.结果 成功构建了大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,大肠杆菌和昆虫细胞中表达的融合蛋白Western blot都能检测到特异性条带.结论 NS1基因在大肠杆菌和昆虫细胞中得到成功表达,为获得大量NS1蛋白进行功能研究及抗体制备奠定了基础.

关键词：禽流感病毒、H5N1、NS1基因、表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2005CB121000

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1067-1070