十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7的原核表达、纯化及抗凝活性鉴定

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性.方法 运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用镍亲和层析一步纯化融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白;先后用几丁质亲和层析及镍亲和层析两个步骤纯化自切割后带6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测纯化表达产物的体外抗凝活性.结果 获得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的编码序列并成功构建了原核表达重组质粒;AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B均在大肠中得到了高效可溶表达,纯化产物具有一定抗凝活性,它们延长aPTT比延长PT更有效.AduNAP7B的抗凝活性显著强于AduNAP7及AduNAP7A.结论 AduNAP7具有较强抗凝活性,但显著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2.AduNAP7的抗凝效应可能利于钩虫在人体内的吸血寄生生活,其抗凝作用机制有待进一步研究.

关键词：十二指肠钩虫、抗凝蛋白AduNAP7、原核表达、纯化、抗凝活性

所属期刊栏目：23

分类号：R383(医学寄生虫学)

资助基金：广东省自然科学基金04011381

在线出版日期：2007-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1021-1025