乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达及其初步应用

摘要：

目的 克隆表达日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的E基因,研究其抗原性,并初步作为诊断抗原建立JEV抗体检测方法.方法用RT-PCR方法扩增E基因全长,然后克隆到pFastbacTM载体中,转化宿主菌DH5a中,提取阳性克隆质粒转导到DH10Bac,利用通用引物鉴定阳性,提取其基因组转染昆虫细胞sf9,而后经IFA和Western blot进行鉴定.挑蚀斑纯化获得高纯度和高滴度的重组病毒,收集细胞裂解上清作为抗原建立间接ELISA方法,对不同年龄段猪血清进行检测.结果从JEV中成功克隆E基因,并在昆虫细胞中得到表达,分子量约53kD,具有良好的抗原性.建立的ELISA方法的抗原最佳包被浓度为30μg/ml,待检血清的最佳稀释度为1 ∶40,阳性判定标准初步定为OD450≥0.3,且OD值待检血清/ OD值阴性血清≥2.结论 JEV的E基因经过体外昆虫细胞表达,获得抗原性良好的蛋白作为诊断抗原,用其建立的ELISA方法能很好用于猪群JEV抗体水平的检测.

关键词：乙型脑炎病毒、Bac-to-Bac表达、ELISA方法

所属期刊栏目：23

分类号：R446.5(诊断学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划

在线出版日期：2007-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：873-877