结核分枝杆菌ESAT-6基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

摘要：

目的 体外扩增结核杆菌ESAT-6 基因,并构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-ESAT-6和重组耻垢分枝杆菌.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,克隆入pGEMT载体.然后,构建亚克隆ps3000-ESAT-6大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将ESAT-6基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2 155)中,热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察ESAT-6蛋白的表达,Western blotting鉴定其生物学活性.结果 成功扩增了结核杆菌ESAT-6基因;正确构建穿梭质粒ps3000-ESAT-6,用pET表达系统ESAT-6纯化蛋白免疫小鼠的多抗血清通过Western blot证实了该重组耻垢杆菌中有表达并具有生物学活性.结论 ESAT-6重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达ESAT-6蛋白的重组BCG( Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础.

关键词：结核杆菌、ESAT-6、耻垢分枝杆菌、重组BCG

所属期刊栏目：23

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2007-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：745-748