产单核细胞李斯特菌plcB基因的克隆与原核表达

摘要：

目的 克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因.方法 利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因.采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体,获得pGEX-6p-1-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达.对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析.结果 克隆的plcB基因长834bp,与GenBank上公布的序列完全相同;表达的与GST标签蛋白融合的广谱磷脂酶C蛋白(GST-PC-PLC)具有磷脂酶生物活性和免疫原性.结论 成功构建产单核细胞李斯特菌plcB基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,这为进一步研究PC-PLC蛋白的致病与免疫机理奠定了基础.

关键词：产单核细胞李斯特菌、plcB基因、广谱磷脂酶C、原核表达

所属期刊栏目：23

分类号：R378.99(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30425031;FANEDD专项资金200358

在线出版日期：2007-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：652-655