家蝇抗菌肽基因Cecropin在COS-7细胞中的表达及产物活性初步研究

摘要：

目的 初步研究家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其产物的抗菌作用.方法 以Cecropin基因为模板设计2条特异引物,扩增在C端含6×His标签的Cecropin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6.以脂质体Lipofectamine TM 2 000为载体,对COS-7细胞进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72 h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-Trap HP亲合层析柱分离纯化和Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定后,进行杀菌活性的初步检测.结果 转染了重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6细胞培养上清液的纯化物,行Tricine-SDS-PAGE电泳得到与预期分子量大小相符的单一目的条带,该纯化物对大肠杆菌E.coli K12D31具有一定的杀菌活性.结论 家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在COS-7中得到了正确表达.

关键词：天蚕素、真核表达、转染、杀菌活性

所属期刊栏目：23

分类号：R384(医学寄生虫学)

资助基金：广东省广州市科技局科技攻关项目2005Z3-E0211;广东药学院校科研和教改项目20041211

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：566-568