食品中单核细胞增生李斯特菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

摘要：

目的 利用荧光定量PCR技术,建立食品中单核细胞增生李斯特菌污染的快速敏感特异的检测方法.方法 以单核细胞增生李斯特菌的-hlyA基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以单核细胞增生李斯特菌菌株,提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和退火温度,以单核细胞增生李斯特菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性.并初步应用于样品的检测.结果 本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8μmol/L,0.6μmol/L,退火温度为60℃时,具有良好的特异性和敏感性.在10株相关菌株的检测中,除单核细胞增生李斯特菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性.在纯菌条件下,定量检测低限19cfu/ml.稳定性分析表明:同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%.检测样品结果显示Real-time PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便.结论 该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值.

关键词：食品、李斯特菌、快速PCR

所属期刊栏目：23

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖州市医药卫生科学研究计划项目

在线出版日期：2007-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：380-383