结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c基因的重组质粒构建及蛋白表达

摘要：

目的 应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c所编码蛋白的结构特征,并对其进行克隆和表达.方法 利用Bioedit、Dnaman及Pfam等对Rv1246c和Rv1247c所表达蛋白结构进行分析;以结核分枝杆菌H37Rv的基因组为模板,用PCR分别扩增Rv1246c和Rv1247c基因片段,并重组到原核表达载体pET32a(+)中,转化E.coli BL21(DH3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达.通过SDS-PAGE及Western-blot免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况.用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价.结果 生物信息学分析表明它们与大肠杆菌的relBE家族有相似的蛋白模块,Rv1246c蛋白与大肠杆菌RelE同源性是21.55%,Rv1247c同源性是23.85%;两个重组质粒构建成功;通过SDS-PAGE检测分别在31kD和29kD处有特异性条带;Western-blot免疫印迹出现特异性阳性信号;间接ELISA检测多克隆抗体效价均大于1∶40 000.结论 本研究首次成功构建了结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了Rv1246e和Rv1247c蛋白,为进一步研究该组基因的分子功能奠定了良好基础.

关键词：结核分枝杆菌、Rv1246c、Rv1247c、蛋白表达

所属期刊栏目：23

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30271172

在线出版日期：2007-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：142-145,148