汉坦病毒A537核蛋白基因的分段表达及其产物抗原活性的研究

摘要：

目的 构建汉坦病毒S基因不同截短片段的重组表达质粒,并选择表达高活性的重组抗原应用于血清学诊断.方法 从HTN型A537株基因组中扩增出S全长基因,构建TA-A537S克隆;以此为模板扩增出不同长度的截短的S片段,定向插入表达载体pET-30a,获得含不同片段的重组表达载体(pET-1-112,pET-1-119,pET-1-137,pET-1-200,pET-1-292,pET-1-316,pET-1-429,pET-6-119,pET-6-137,pET-6-200,pET-6-292,pET-6-405,pET-16-112,pET-16-137,pET-26-137),并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别进行了表达;应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况,应用Western blot分析重组抗原的活性,采用电洗脱、亲和层析等方法纯化重组蛋白,用间接ELISA法对重组蛋白的抗原性及抗原特异性进行检测.结果 成功构建了含HV S全基因的TA-A537S克隆质粒;以截短的S基因片段构建的重组表达质粒中,既有表达又有活性的有pET-1-112,pET-1-119,pET-1-200,pET-1-292,pET-1-429,pET-6-119,pET-6-200,pET-6-292,pET-6-405;其中pET-6-119表达量最高且活性强;经电洗脱或Ni-NTA亲和层析可获得高纯度的重组蛋白e6-119;纯化的e6-119重组蛋白应用于ELISA检测疑似HFRS和不明原因的发热病人血清IgG,与IFAT比较,其敏感性和特异性分别为94.7%,95.6%.结论 pET-6-119表达量高,易于纯化,并且具有良好的抗原性,是一种廉价、安全、可靠的诊断抗原.

关键词：汉坦病毒、重组核蛋白、原核表达、间接酶联免疫吸附试验

所属期刊栏目：23

分类号：R3(基础医学)

资助基金：福建省科研项目2004YZ01-2;福建省卫生厅青年科研项目2005-1-20

在线出版日期：2007-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：66-70