SARS-CoV Spike蛋白受体结合区的表达及纯化

摘要：

目的 获得稳定表达SARS冠状病毒spike蛋白受体结合区的果蝇细胞系,表达spike蛋白受体结合区.方法 设计引物扩增spike蛋白受体结合区318-513片段,构建重组表达载体S318-pMT/Bip/V5-his,与pCoBlast质粒共转染果蝇S2细胞,经Blasticidin筛选得到的稳定重组细胞系,用硫酸铜诱导表达,Western-Blot检测表达产物.富集的表达产物用镍柱和RESOURCES阳离子交换树脂纯化,SDS-PAGE和Western-Blot检测纯化产物.结果 重组spike蛋白受体结合区可在果蝇S2细胞中分泌表达,且具有特异免疫反应性;经镍柱和RESOURCES纯化可得到纯度达90%以上的重组蛋白.结论 克隆并在真核生物中分泌表达出具免疫反应原性的spike蛋白受体结合区,镍柱和RESOURCES两步纯化可得到高纯度蛋白.

关键词：SARS-CoV ACE2结合区、果蝇S2细胞、表达、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：福建省物质结构研究所前沿交叉学科项目基金IP031049;中国科学院"百人计划"IB021061

在线出版日期：2007-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1108-1110