重组SARS-CoV核衣壳蛋白的表达纯化及其单克隆抗体的制备鉴定

摘要：

目的 目的 表达纯化SARS冠状病毒(SARS-CoV)的核衣壳蛋白(nucleocapsid N蛋白),并制备出高安全性、高特异性的针对该蛋白的单克隆抗体(McAb),为SARS 的早期快速诊断提供有力的抗体工具.方法 在不接触病原体的前提下,采用全基因合成方式分别将SARS-CoV N蛋白编码基因第1-549位碱基(N端)和第496-1269位碱基(C端)直接合成至原核表达载体pET32a(+),表达、纯化重组蛋白(分别记为N1蛋白、N2蛋白),并以纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备特异性针对N蛋白的单克隆抗体,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行配对筛选,分析其亚类,以Western blot 和间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体特异性.结果 成功表达并纯化SARS-CoV N1、N2蛋白,筛选出7株抗SARS-CoV N1 蛋白及2株抗SARS-CoVN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定6株为IgG1,2株为IgG2b,1株为IgG3,Western blot及间接免疫荧光证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoV N蛋白发生特异性反应.结论 重组SARS-CoV N蛋白成功表达及纯化,并由此获得了SARS-CoV 特异性单克隆抗体,为SARS预防检测和发病机制研究奠定基础.

关键词：SARS-CoV、核衣壳蛋白、表达、单克隆抗体

所属期刊栏目：22

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA215015;重庆市科委科研项目7673

在线出版日期：2006-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：741-745