多重PCR方法检测大肠杆菌O157:H7的初步研究

摘要：

目的研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法.方法以大肠杆菌O157:H7的O157抗原基因(rfbE基因)、鞭毛H7抗原基因(fliC基因)、粘附素基因(eaeA基因)和志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ(SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因)为扩增对象,设计能导至目的片段大小不同的5对引物,通过优化条件,建立了可用于粪便检测的大肠杆菌5重PCR.结果在同一扩增体系中,检测了5株不同来源的大肠杆菌O157:H7及27株非大肠杆菌O157:H7细菌.结果表明,该方法能从2株大肠杆菌O157:H7中扩增出rfbE、fliC、eaeA、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因,它们的大小分别为582 bp、802 bp、487 bp、368 bp和177 bp.而另外3株大肠杆菌O157:H7也能扩增出除eaeA、SLT-Ⅱ基因外的其它3个基因片段.表明该方法可用于检测大肠杆菌O157:H7,还可检测细菌是否含有毒素基因.在检测27株非大肠杆菌O157:H7,除O149出现SLT-Ⅱ扩增产物和O1:H7出现fliC基因扩增产物外,其它非大肠杆菌O157:H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性.当粪便样品经增菌培养12 h,用该5重PCR体系能检测出最初接种量为5cfu/g粪便的样品.结论本5重PCR方法具有较高的特异性和敏感性,可迅速、有效地将大肠杆菌O157:H7与其它非大肠杆菌O157:H7相区别,同时还能检测O157:H7中的毒力因子.因此,通过进一步研究,本方法有望应用于临床大肠杆菌O157:H7感染的辅助诊断.

关键词：大肠杆菌O157:H7 PCR、rfbE基因、fliC基因、eaeA基因、SLT-Ⅰ基因、SLT-Ⅱ基因

所属期刊栏目：22

分类号：R4(临床医学)

资助基金：广东省科研项目2002B21406;广东省广州市科技攻关项目GK0401001

在线出版日期：2006-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：428-432