霍乱弧菌O139 mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定

摘要：

目的克隆霍乱弧菌O139临床菌株的甘露糖敏感血凝素(Mannose-Sensitive Hemagglutinin,MSHA)基因,构建原核表达系统,鉴定重组表达产物的免疫反应性.方法高保真PCR扩增mshA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白(rMSHA)表达、Ni-NTA亲和层析法收集蛋白;Western blot鉴定其免疫反应性.结果所克隆的mshA基因与GenBank报道的(AE004128)序列完全一致.构建的mshA基因原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coli BL21(DE3)表达量占细菌总蛋白的20%以上.表达的蛋白(约20kD)可与His单克隆抗体发生特异性免疫结合.结论成功构建了霍乱弧菌O139mshA基因的高效原核表达系统,表达的rMSHA蛋白有良好的免疫反应性,为进一步研制MSHA及其抗体检测试剂盒奠定了基础.

关键词：霍乱弧菌O139、mshA基因、克隆、表达、免疫反应性

所属期刊栏目：22

分类号：R3(基础医学)

资助基金：浙江省教育厅资助项目20010383

在线出版日期：2006-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：403-406