大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因改建及其表达产物粘膜免疫佐剂活性的研究

摘要：

目的改建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因序列以提高重组LTB(rLTB)原核表达量,确定重组改建LTB(rrLTB)粘膜免疫佐剂活性.方法按大肠杆菌偏爱密码子合成全长LTB基因的核苷酸序列.构建pET32a-rLTB原核重组表达质粒及pET32a-rLTB-E.coliBL21DE3表达系统,提取重组质粒并测定其插入的rLTB基因序列.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶成像分析系统鉴定rrLTB表达产量,并与未改建的重组LTB(roLTB)比较.采用GM1-ELISA确定rrLTB和roLTB结合牛GM1的能力.分别以幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位(rUreB),检测rrLTB和roLTB对rUreB对幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠保护作用及产生特异性S-IgA的增强效应.结果pET32a-rLTB-E.coliBL21DE3经1 mmol/LIPTG诱导后,rrLTB表达量约占细菌总蛋白的35.4%,为roLTB(2.8%)的12.6倍.GM1-ELISA结果证实rrLTB和roLTB均能与牛GMi结合.单一rUreB对感染小鼠的免疫保护率为66.7%,但与rrLTB或roLTB合用时,保护率可至91.6%,并可提高感染小鼠特异性S-IgA产生量(P＜0.01).结论改建的LTB基因能明显提高表达量,所表达的rrLTB仍保持较强的粘膜免疫佐剂活性.

关键词：大肠杆菌、LTB基因/改建、重组蛋白/表达、粘膜免疫、佐剂活性

所属期刊栏目：22

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：385-390