SARS-CoV GDH株N蛋白全长基因克隆及其可溶性表达

摘要：

目的构建SARS冠状病毒N蛋白的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达并纯化,鉴定其抗原性.方法以我国SARS冠状病毒GDH株总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增N 蛋白的全长基因,TA克隆后测序.构建pET-23d的N基因表达载体,用IPTG诱导目的蛋白表达,利用硫酸铵沉淀、分子筛层析及离子交换层析纯化重组蛋白,免疫印迹鉴定重组蛋白.结果 RT-PCR扩增出1269bp SARS冠状病毒N蛋白的基因片段,其序列分析结果与SARS-CoV GD01、BJ01株的同源性为99.92%;该基因在大肠杆菌表达系统中高效表达,占可溶性蛋白的33.57%,表达产物为非融合的可溶性蛋白, Western blot结果显示重组N蛋白具有良好的抗原性;纯化后重组N蛋白纯度为92.9%.结论成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒,并在大肠杆菌中以非融合蛋白的形式得到高效的可溶性表达,为SRAS的诊断和疫苗的研制奠定了基础.

关键词：SARS-CoV、RT-PCR、N蛋白、克隆、表达

所属期刊栏目：21

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：军队医药卫生科研项目

在线出版日期：2005-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：666-669