重组抗原LTB-UreB-HpaA对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性及内置佐剂LTB的免疫增强作用

摘要：

目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)和幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)、幽门螺杆菌粘附素A(HpaA)的融合基因ltB-ureB-hpaA及其原核表达系统,鉴定重组表达产物rLTB-UreB-HpaA的免疫原性、佐剂活性及对Hp感染小鼠的保护作用.方法采用连接引物PCR构建ltB-ureB-hpaA融合基因,T-A克隆后测序.采用pET42a质粒及其宿主菌E.coliBL21DE3亚克隆构建原核表达系统pET42a-ltB-ureB- hpaA-E.coliBL21DE3,并用不同浓度IPTG诱导表达.SDS-PAGE用于检测rLTB-UreB-HpaA的表达及其产量,免疫双扩散试验及Western印迹法检测rLTB-UreB-HpaA抗原性和免疫反应性.建立牛GM1的ELISA(GM1-ELISA)检测重组蛋白中rLTB的佐剂活性.采用Hp SS1株BaLb/C小鼠感染模型,检测rLTB-UreB-HpaA的免疫保护作用.结果 ltB-ureB-hpaA核苷酸序列与各原始基因序列完全相同.不同浓度的IPTG均可诱导pET42a-ltB-ureB-hpaA-E.coliBL21DE3表达rLTB-UreB-HpaA,其产量约为细菌总蛋白的15%.rLTB-UreB-HpaA家兔抗血清的双扩效价为1:8.商品化兔抗Hp全菌抗体、兔抗UreB或HpaA均能识别rLTB-UreB-HpaA并与之结合.GM1-ELISA结果证实rLTB-UreB-HpaA仍具有结合牛GM1的活性.rLTB-UreB-HpaA(200 μg/每只小鼠)免疫后,可使小鼠100%免于Hp SS1株的感染.10 μg rLTB与rUreB或rHpa共同免疫小鼠,可使保护率分别从66.7%提高至81.8%和83.3%.结论本研究成功地构建了ltB-ureB-hpaA融合基因及其原核表达系统.目的表达产物rLTB-UreB-HpaA有良好的免疫原性、佐剂活性及免疫保护效果,具有作为Hp基因工程疫苗的应用前景.

关键词：幽门螺杆菌、重组抗原、内置佐剂、疫苗、免疫保护、免疫增强

所属期刊栏目：21

分类号：R383.1(医学寄生虫学)

资助基金：教育部优秀青年教师资助计划

在线出版日期：2005-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：645-651