肺炎支原体P1黏附蛋白基因的克隆与表达

摘要：

目的对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)3'端的P1黏附蛋白基因片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和表达产物的免疫性分析,为临床诊断试剂和疫苗的研制打下基础.方法应用PCR技术直接从Mp FH株染色体DNA中扩增894 bp的3'端p1基因片段(p1'),将此基因片段插入表达载体pGEX-6P-1后,转入大肠杆菌BL21扩增后提取重组质粒进行酶切、PCR扩增及核苷酸测序进行鉴定.诱导阳性克隆株表达重组蛋白后纯化,用兔抗Mp多克隆血清通过免疫印迹实验鉴定其免疫反应性.结果插入重组质粒的p1基因片段经测序后,与GenBank中p1基因核苷酸序列(AF290001、AF290002、AF286371、AE000002、M21519、M18639)比较,其同源性为99.66%～100%.氨基酸序列同源性为99.32%～100%.经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为59kDa.免疫印迹实验证实重组蛋白是P1黏附蛋白抗原.结论成功构建了pGEX-6P-1-p1'重组质粒并获得表达.此p1'基因重组质粒表达的蛋白具有免疫反应性,有希望成为特异性抗原诊断试剂和疫苗的候选抗原.

关键词：肺炎支原体、P1黏附蛋白、克隆表达

所属期刊栏目：21

分类号：R375(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：辽宁省自然科学基金1998-2000

在线出版日期：2005-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：470-472,478