10.3969/j.issn.1002-2694.2004.12.007
弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选
目的构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,建立基因敲除突变株,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法.方法用基因克隆方法将 SAG3 1.53kb和 2.81kb 两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,氯霉素乙酰转移酶( CAT) 抗性基因作为筛选标记,采用电转移转染细胞方法进行基因打靶,建立突变型的弓形虫株,采用PCR、酶切分析和Southern Blot 杂交方法筛选鉴定. 结果构建了弓形虫RH株5 'SAG3-TUB5/CAT-3 ' SAG3置换型载体,获得了敲除SAG3 基因的弓形虫突变株,建立基因敲除突变株,获得了阳性的筛选克隆,经鉴定证明基因打靶结果准确.结论通过构建基因打靶载体,可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因,为进一步研究弓形虫侵入机制,探讨弓形虫病防治提供可行的方法.
弓形虫、膜抗原、SAG3、基因打靶、载体
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R382.5(医学寄生虫学)
国家自然科学基金39970668
2005-01-13(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
1045-1048,1061