西尼罗病毒RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

摘要：

目的建立西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)RT-PCR检测方法,为WNV感染的诊断和流行病学调查奠定基础.方法选择Vero-E6细胞进行WNV培养,通过乳鼠脑内接种病毒培养液获得WNV感染脑组织.在病毒基因组E区和C区设计3对引物,以WNV培养液,建立并优化病毒核酸RT-PCR分析方法.然后,以此对感染蚊虫模拟标本和乳鼠脑组织进行检测.PCR产物测序后,用Blast进行同源性分析.结果用RT-PCR在WNV培养液中扩增出与预期大小一致的核苷酸片段,并通过改变循环数,模板稀释倍数等参数对该方法进行了优化;将建立的方法用于检测感染蚊虫模拟标本和感染乳鼠脑组织,均检测出WNV目的基因片段,且扩增效果与病毒培养液无明显差异;套式PCR能显著提高检测的敏感性(108-109倍).结论本研究建立的WNV RT-PCR检测方法具有较高的敏感性,可用于WNV感染的流行病学调查研究.

关键词：西尼罗病毒、RT-PCR

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分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国博士后科学基金2003033196;国家科技攻关项目2 003BA712A,08-01

在线出版日期：2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：737-740