弓形虫P30的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

摘要：

目的获得能表达弓形虫P30蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P30蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响.方法通过PCR扩增获得P30基因片段,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(-)中,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆,采用脂质体将重组质粒转染到RAW264.7巨噬细胞中,通过Hygromycin筛选和PCR、免疫组化鉴定,用流式细胞术DNA倍体分析计算稳定转染和瞬时转染P30 基因的巨噬细胞的凋亡率.结果1.PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定,均与预期设计相符合,DNA序列分析发现重组质粒中的目的基因序列与文献报道相符. 2.PCR和免疫组化鉴定发现转染P30重组质粒的巨噬细胞能稳定地复制质粒并表达弓形虫P30蛋白.3.P30稳定转染的细胞凋亡率均在2%左右,不同细胞之间没有区别.4.瞬时转染空载体和P30重组质粒的巨噬细胞其凋亡率均在6%左右,没有区别. 结论1.获得了含P30基因的重组质粒以及能稳定表达弓形虫P30蛋白的小鼠巨噬细胞克隆. 2.无论是稳定转染还是瞬时转染,均不能引起巨噬细胞的凋亡,说明内源性表达的弓形虫P30蛋白对小鼠巨噬细胞的凋亡没有影响.

关键词：弓形虫、主要表面抗原P30、基因克隆、巨噬细胞、凋亡

所属期刊栏目：20

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：福建省自然科学基金C9810029;福建医科大学校科研和教改项目2002M011

在线出版日期：2004-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：670-674