幽门螺杆菌Mr26 000外膜蛋白真核载体的构建及表达蛋白的鉴定

摘要：

目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)26 000外膜蛋白编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础.方法从原核表达质粒pET32a(+)/594中,酶切H.pylori 26 000外膜蛋白编码基因片段,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3.1进行连接,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3.1/594,并在COS-7细胞中表达,以RT-PCR,Dot blot法检测其表达产物.结果经酶切证实插入的基因片段为H.pylori 26 000外膜蛋白编码基因;采用RT-PCR方法,能够从转染COS-7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段;同时Dot blot法等检测显示,该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白.结论成功地构建了真核重组载体pcDNA3.1/594,并在COS-7细胞中表达,为H.pylori核酸疫苗的研制奠定了良好的基础.

关键词：幽门螺杆菌、外膜蛋白、斑点印迹、真核表达载体

所属期刊栏目：20

分类号：R387.2(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30371318

在线出版日期：2004-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：596-600