产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

摘要：

目的利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素.方法设计针对α毒素基因的一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增出α毒素的全基因.经测序确认正确后,回收的α毒素目的条带与pGEX6p-1表达载体经限制性内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,进行连接,转化大肠杆菌BL21.诱导表达后,做SDS-PAGE电泳,出现特异的表达产物条带.表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验.结果构建的重组质粒经内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,发现特异的目的基因条带.SDS-PAGE电泳后,发现重组菌株有特异的表达条带.实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性.结论重组菌株BL21(pGEX6p-1-cpα)表达了具有活性的α毒素蛋白.

关键词：产气荚膜梭菌、α毒素、重组表达

所属期刊栏目：20

分类号：R378.8(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：573-576