恶性疟原虫FCC1/HN株嘌呤核酸磷酸化酶(PNP)基因的克隆和原核表达

摘要：

目的从恶性疟原虫基因组中扩增、克隆恶性疟原虫嘌呤核酸磷酸化酶(PNP)基因,并进行原核表达产物.方法根据恶性疟原虫FCB株嘌呤核酸磷酸化酶基因编码序列,设计一对引物,引入EcoRⅠ和XhoⅠ.采用PCR技术从恶性疟原虫FCC/HN株基因组DNA中特异扩增PNP基因.纯化后扩增产物用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,定向克隆入原核质粒pET30a(+)和真核质粒pcDNA3,重组质粒pET30a(+)-PNP转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子后,用PCR、EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切和DNA序列测定鉴定.用IPTG诱导重组质粒pET30a(+)-PNP表达融合蛋白.结果从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组中特异扩增出PNP基因,将扩增的目的基因正向插pET30a(+)和pcDNA3表达质粒的EcoRⅠ和XhoⅠ位点;重组子pET30a(+)-PNP在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达中表达,表达融合蛋白分子量为31.4kDa.结论从恶性疟原虫基因组中获取PNP基因,并成功构建pET30a(+)-PNP和pcDNA3-PNP重组质粒,获得PNP原核表达产物.

关键词：恶性疟原虫、嘌呤核酸磷酸化酶、克隆、表达

所属期刊栏目：20

分类号：R382.3(医学寄生虫学)

资助基金：广东省团队研究项目;高等学校博士学科点专项科研项目

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：522-525