镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA文库的构建

摘要：

目的为了筛选抗蜱及蜱传疾病基因工程疫苗的抗原候选分子,构建了镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库.方法用Trizol试剂提取镰形扇头蜱半饱血雌蜱总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用长链PCR(LD-PCR)扩增方法,合成双链cDNA.双链cDNA(ds cDNA)在SfiⅠ内切酶的作用下,形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的粘性末端.经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集500bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA噬菌体表达文库.结果经测定,库容量为4.2×106,重组率为96%.扩增后的文库滴度为2.04×1010pfu/ml.通过对文库中随机挑选的15个克隆进行序列分析,获得一个编码线粒体ATP酶第6亚基蛋白的全长cDNA序列.结论结果显示,镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA表达文库已构建成功.

关键词：镰形扇头蜱、半饱血雌蜱、cDNA文库

所属期刊栏目：20

分类号：S852.746(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点基础研究发展基金973计划2001CCA00900

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：485-488