16S rDNA多重PCR检测牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌和齿垢密螺旋体及混合感染与慢性牙周炎病变程度关系

摘要：

目的 建立多重16S rDNA PCR方法用以同时检测慢性牙周炎(CP)临床标本中牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线放线杆菌(Aa)和齿垢密螺旋体(Td)，并了解不同感染情况与慢性牙周炎严重程度的关系。方法 采集152例CP患者牙周袋标本，并按Hugoson的方法将其分为轻、中和重度三类，另采集30例牙周健康者龈沟标本作为正常对照。上述临床标本置于200μl裂解缓冲液中，100℃冰浴10 min后取10μl上清液直接作为PCR的模板。采用常规酚-氯仿法提取Pg ATCC33277株、Aa Y4株、Td FM株和E.coli DH5α株的DNA分别作为PCR的阳性和阴性对照。采用Pg、Aa和Td 16S rDNA特异性引物，建立多重PCR检测上述标本。3例Pg、Aa和Td PCR结果均阳性患者牙周袋标本目的扩增片段T-A克隆后测序。采用χ2检验分析Pg、Aa和/或Td感染率与牙周炎严重程度之间的关系。结果 所建立的多重16S rDNA PCR最低可检出10个Pg、20个Aa和20个Td细胞。Pg、Aa和Td 16S rDNA扩增片段测序结果与已报道的相应序列比较，相似性分别高达99.45％、97.08％和96.59％。30例牙周健康者龈沟标本中，仅有1例(3.3％)Pg、2例(6.7％)Aa的16S rDNA扩增结果阳性，其余标本均阴性。152例CP患者牙周袋标本中，147例(96.7％)检出Pg、Aa和/或Td的16S rDNA，5例(3.3％)扩增结果均阴性。Pg的PCR检测阳性率(91.5％，139/152)明显高于Aa(72.4％，110/152)或Td(80.9％，123/152)(χ2=7.07，18.67；P＜0.01)。89.8％的患者标本有两种(26.5％)或三种微生物(63.3％)同时感染，且中、重度牙周炎混合感染率明显高于轻度牙周炎(χ2=10.43，P＜0.01)。结论 所建立的同时检测多重16S rDNA PCR有较高的敏感性和特异性，可用于临床Pg、Aa和Td实验室检测。多种牙周病原微生物协同致病作用与CP严重程度有因果关系。

关键词：慢性牙周炎、牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌、齿垢密螺旋体、多重PCR 16S rDNA基因

所属期刊栏目：20

分类号：R781.4(口腔科学)

资助基金：浙江省自然科学基金 N29953

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：461-466