弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核表达质粒的构建

摘要：

目的构建弓形虫RH株致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒.方法参照GRA8序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增出编码GRA8的基因片段,克隆至pMD18-T载体;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析;各组阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAX1,分别转化大肠杆菌BL21和JM109,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组表达质粒免疫小鼠,观察其诱导的抗体应答.结果 PCR扩增出GRA8基因的特异片段,各组阳性克隆的序列正确,并分别被亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAX1上,构建了弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了GRA8的融合蛋白;真核重组表达质粒诱导小鼠产生了抗弓形虫抗原的抗体.结论以pGEX-4T-2和pVAX1为载体,分别成功构建了GRA8的原核和真核重组表达质粒.

关键词：弓形虫、致密颗粒抗原、GRA8、克隆、表达

所属期刊栏目：20

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

在线出版日期：2004-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：203-206,210