斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA的克隆和表达

摘要：

目的克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,并进行原核表达.方法利用简并引物,进行RT-PCR,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段.TA克隆装入pUCm-T载体,进行鉴定、测序;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析.将获得的cDNA片段克隆入Pin-PointTMXa-1 T表达载体,经过筛选后,在大肠杆菌中进行原核表达.通过SDS-PAGE电泳和Western blot方法鉴定表达产物,并检测所表达融合蛋白的免疫反应性.结果 RT-PCR扩增出了一500bp左右的cDNA片段,对阳性克隆测序后获得其核酸序列,长498bp.推导出的氨基酸序列长166;氨基酸序列的同源性分析显示,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺残基高度保守.原核表达中,对表达产物的鉴定结果和免疫反应性检测结果均显示,目的克隆在33kDa处有一明显条带.结论本实验克隆获得了斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,其序列中包含了与该酶活性有关的重要位点.原核表达获得一33kDa的融合蛋白,该融合蛋白具有免疫反应性.

关键词：斯氏狸殖吸虫、半胱氨酸蛋白酶、克隆、表达

所属期刊栏目：19

分类号：R383.2(医学寄生虫学)

在线出版日期：2004-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：24-28