人幽门螺杆菌VacA与HspA双价候选疫苗抗原的克隆表达及鉴定

摘要：

目的构建含人幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)和细胞空泡毒素(VacA)编码基因的重组载体,进行核苷酸序列分析,并在E.coli BL21中表达,研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础.方法利用分子克隆技术从Hp DNA染色体中,扩增HspA、VacA编码基因片段,将目的基因HspA、VacA与载体pET32a(+)分别进行双酶切后,连接、测序;同时将重组载体pET32a(+)/HspA和pET32a(+)/VacA分别经Xhol、BamHI双酶切,通过凝胶电泳回收pET32a(+)/HspA和VacADNA片段,经T4连接酶将HspA和VacA编码基因通过酶切粘端进行连接,而后转化并筛选含有两种目的基因的重组载体,并在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经纯化后,以Western blot法检测其抗原性.结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp HspA和VacA编码基因,由1080bp组成,与GenBank报道的相比较,本实验克隆的基因有3.40%的碱基发生变异,导致1.10%的氨基酸残基改变;经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白Mr为59×103,其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×103,可溶性表达产物占全菌总蛋白的18.96%;重组蛋白经Ni2+-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上;用Western blot法检测显示,该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性.结论成功地克隆并融合表达了Hp HspA和VacA,为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制以及快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的基础.

关键词：幽门螺杆菌、热休克蛋白A、细胞空泡毒素、原核表达载体

所属期刊栏目：19

分类号：R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：48-54