弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达

摘要：

目的扩增弓形虫主要表面抗原(SAG2)编码基因片段并进行重组表达.方法设计合成1对引物,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列,以低熔点琼脂糖回收纯化,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后,再插入表达载体pGEX-4T-2,经PCR和双酶切筛选,测序验证后,在大肠杆菌中进行表达,并用SDS-PAGE和Westem blot鉴定.结果从弓形虫核酸提取物中扩增出约477bp的SAG2基因,构建成功了重组质粒pGEX-4T-2-SAG2;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达.SDS-PAGE电泳pGEX-4T-2-SAG2的融合蛋白条带的分子量约为42kD,Westen-blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别.结论GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础.

关键词：弓形虫、SAG2表面抗原、克隆、GST融合表达、免疫印迹

所属期刊栏目：19

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

在线出版日期：2003-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：42-45