弓形虫GRA1基因的体外扩增、克隆及鉴定

摘要：

目的体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA1基因,并构建真核表达质粒.方法从接种了弓形虫RH株的小鼠腹水中收集、纯化速殖子,提取基因组DNA;据已知的GRA1基因列,设计合成一对引物,并引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点.应用 PCR技术,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段.扩增目的基因片段经纯化、双酶切后,插入真核表达质粒pEGFP-N3中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,于卡那霉素阳性LB平板上筛选阳性克隆.重组子经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切、PCR鉴定.结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出785bp的GRA1基因片段,构建重组质粒pEGFP N3-GRA1,酶切和PCR鉴定产物大小均与预期值相符.结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了GRA1基因,并构建了pEGFP N3-GRA1重组质粒.为重组质粒的进一步表达和核酸疫苗的研究创造了条件.

关键词：弓形虫、致密颗粒抗原1、聚合酶链反应、基因克隆

所属期刊栏目：18

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：美国中华医学会资助项目93-594;国家"211"工程建设项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：17-19，9