类鼻疽伯克霍尔德氏菌UDPE检测方法的建立和应用

摘要：

目的 建立防止产物污染的UDPE(UDG-Duplex PCR-EIA)技术，用于检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌。方法选择类鼻疽伯克霍尔德氏菌FUR(Ferric Uptake Regulator)基因为靶序列，设计两对引物进行PCR扩增，用UDG(尿嘧啶糖基化酶)防止PCR产物污染，并用微孔板杂交-酶联显色检测扩增的PCR产物片段；用不同的模板考察方法的特异性和灵敏度。结果该检测系统可以特异性地检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌；对于纯DNA模板，检测灵敏度可以达到10fg/μl；对于系列稀释菌液提取的模板，灵敏度可达0.1个菌/μl；对于模拟污水标本、模拟组织标本和模拟土壤标本的检测灵敏度分别为10个菌/μl，100个菌/μl和100个菌/μl；检测系统可以防止109个PCR产物分子的污染；检测系统可以在37℃下稳定保存7d。结论本研究建立了稳定的，防止产物污染，灵敏度和特异性均较理想的类鼻疽伯克霍尔德氏茵UDPE检测系统。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德氏菌、尿嘧啶糖基化酶(UDG)、PCR、微孔板杂交

所属期刊栏目：17

分类号：R378.8(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：35-37